色谱聚焦利用离子交换剂本身的带电基团的缓冲作用，当洗脱缓冲液不断滴到离子交换柱上时，柱内自动形成pH梯度;洗脱过程中在柱上某位点的pH随着更多的缓冲剂加入而逐渐下降;形成pH~的下降梯度，可选择用起始缓冲液平衡到pH，洗脱液的pH选定为pH，;整个色谱柱被洗脱液所平衡，最后流出液的pH等于洗脱液的pH